dna sequencing原理：DNA定序(DNA Sequencing)

DNA測序（DNA sequencing，或譯DNA定序）是指分析特定DNA片段的鹼基序列，也就是腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）與鳥嘌呤的（G）排列方式。快速的DNA測序方法的出現極大地推動了生物學和醫學的研究和發現。 在基礎生物學研究中，和在眾多的應用領域，如診斷，生物技術，法醫生物學，生物系統學中，DNA序列知識已成為不可缺少的知識。具有現代的DNA測序技術的快速測序速度已經有助於達到測序完整的DNA序列，或多種類型的基因組測序和生命物種，包括人類基因組和其他許多動物，植物和微生物物種的完整DNA序列。 一、基本方法 1.Maxam-Gilbert測序法：化學法會對操作者造成傷害 2.Sanger測序法 Sanger（桑格）雙脫氧鏈終止法是Frederick Sanger於1975年發明的。測序過程需要先做一個聚合酶連鎖反應（PCR）。PCR過程中，雙脫氧核糖核苷酸可能隨機的被加入到正在合成中的DNA片段里。由於雙脫氧核糖核苷酸多脫了一個氧原子，一旦它被加入到DNA鏈上，這個DNA鏈就不能繼續增加長度。最終的結果是獲得所有可能獲得的、不同長度的DNA片段。目前最普遍最先進的方法，是將雙脫氧核糖核苷酸進行不同熒游標記。將PCR反應獲得的總DNA通過毛細管電泳分離，跑到最末端的DNA就可以在雷射的作用下發出熒光。由於ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP（4種雙脫氧核糖核苷酸）熒游標記不同，計算機可以自動根據顏色判斷該位置上鹼基究竟是A，T，G，C中的哪一個。 A.步驟＊Sanger法除了加入4個dNTP之外，另外也分別在四個試管中加入四個不同的ddNTP (兩者比例為dNTP：ddNTP = 200 : 1) ＊當接上的為ddGTP，合成便會停止。在合成的過程中，因為接上ddGTP的長度是隨機的，所以可以得到各種長度的片段，此時進行電泳，從電泳最下面(最短，第一個便接上ddGTP)往上讀到最上面(最長，最後才接上ddGTP)，這裡讀出的是primer的序列 ＊相同地，四個試管裡分別裝入Dideoxy A、Dideoxy G、Dideoxy T、Dideoxy C ，如此便可以得到許多小片段的基因，拿去跑電泳，得知分子量大小後，從電泳最下面(最短，第一個便接上ddGTP)往上讀到最上面(最長，最後才接上ddGTP)，即可得知每段基因的最後...